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微液滴數字PCR平台


獨特的(de)産品優勢
1加樣體(tǐ)積可(kě)調   加樣體(tǐ)積在(zài)20-50μL內(nèi)可(kě)調,更多(duō)加樣量,意味着更高靈敏度
2樣品數量靈活   每張芯片可(kě)處理1 -8個樣本,靈活可(kě)調,節省試劑耗材
3微滴數多(duō)       30μL樣本可(kě)制(zhì)備約5萬個均一(yī)穩定的(de)納升級液滴,線性範圍廣,爲0-30萬拷貝/樣本。
4微滴無需轉移      全封閉體(tǐ)系,操作(zuò)簡單,微滴生成後無需轉移,減少(shǎo)微滴損失
5封閉檢測          檢測時機器封閉運行(xíng),确保PCR産物(wù)不暴露在(zài)空氣中(zhōng),防止氣溶膠污染和(hé)樣本損失,預防假陽性
6單獨加樣           每個樣本獨立加樣控制(zhì),避免樣本間(jiān)交叉污染
7信噪比高       相(xiàng)比成像方法,基于PMT進行(xíng)信号檢測,容易判讀(dú),結果準确


檢測流程

液滴制(zhì)備(5分(fēn)鍾)+ PCR擴增(1.5小時)+ 檢測分(fēn)析(25分(fēn)鍾)= 2小時
 
數字PCR十大應用
1基因表達差異研究  
數字PCR可(kě)以提供比實時熒光(guāng)定量PCR更精确的(de)基因差異表達研究,尤其對(duì)于那(nà)些靶基因表達差異微小的(de)情況,如(rú):mRNA、microRNA、 IncRNAs等的(de)表達分(fēn)析;等位基因的(de)不平衡表達;單細胞基因表達分(fēn)析;外(wài)泌體(tǐ)核酸分(fēn)子(zǐ)定量分(fēn)析等
2低豐度DNA模闆分(fēn)子(zǐ)的(de)精确定量
由于絕大部分(fēn)微液滴中(zhōng)隻含單個或不含模闆分(fēn)子(zǐ),使得(de)低豐度DNA模闆分(fēn)子(zǐ)的(de)擴增不受高豐度模闆分(fēn)子(zǐ)擴增的(de)競争抑制(zhì),與此同時,樣本中(zhōng)可(kě)能(néng)存在(zài)的(de)抑制(zhì)劑也(yě)在(zài)分(fēn)配到微液滴的(de)過程中(zhōng)進行(xíng)了相(xiàng)對(duì)稀釋,作(zuò)用于單個微液滴內(nèi)模闆擴增的(de)抑制(zhì)劑數量大幅降低,從而提高PCR擴增對(duì)抑制(zhì)劑的(de)耐受程度,因此可(kě)應用于諸多(duō)臨樣本(如(rú)血液、尿液、糞便、痰液、胸腹水、 腦脊液等)中(zhōng)痕量核酸标記物(wù)的(de)檢測。一(yī)般而言, 定量PCR的(de)檢測靈敏度約在(zài)1%, NGS的(de)靈敏度可(kě)達到1%,而數字ECR的(de)檢測下限可(kě)輕松實現0.01%
3拷貝數變異(CNV)研究
數字PCR直接讀(dú)取陽性信号,通(tōng)過泊松分(fēn)布校正得(de)到目标基因的(de)絕對(duì)拷貝數,爲拷貝數變異的(de)研究提供了絕對(duì)的(de)檢測精度。采用數字PCR能(néng)夠有效對(duì)二代測序(NGS)和(hé)微陣列比較基因組雜交(aCGH)等實驗結果進行(xíng)驗證,并具有 檢測周期短(duǎn)、成本低、樣本通(tōng)量高等特點
4甲基化含量鑒定
傳統的(de)亞硫酸氫鹽處理後的(de)克隆測序法、抗體(tǐ)檢測法、定量PCR檢測法等受限于方法學(xué)的(de)問(wèn)題,不能(néng)獲得(de)甲基化程度的(de)精确定量,而數字PCR 系統通(tōng)過對(duì)樣本的(de)微液滴處理及目标分(fēn)子(zǐ)的(de)絕對(duì)拷貝數定量,爲甲基化程度的(de)精确定量檢測提供了一(yī)種可(kě)靠的(de)技術
5二代測序輔助建庫
目前靶向測序建庫方法包括擴增子(zǐ)方法,在(zài)均相(xiàng)溶液中(zhōng),當擴增引物(wù)增加時,由于擴增引物(wù)之間(jiān)的(de)相(xiàng)互作(zuò)用,從而影響擴增的(de)效率;如(rú)果将其分(fēn)散到大量微液滴中(zhōng)擴增,将可(kě)大大降低引物(wù)間(jiān)相(xiàng)互作(zuò)用,提高擴增效率。同時還可(kě)以實現對(duì)于少(shǎo)量模闆的(de)有效擴增,得(de)到更多(duō)的(de)有效測序數據
6 CRISPR-Cas9基因編輯結果驗證
CRISPR-Cas9技術的(de)發明(míng),是基因編輯技術的(de) 一(yī)大突破,但如(rú)何驗證實驗是否成功,仍需要 高靈敏度的(de)檢測方法,數字PCR技術可(kě)以滿足這(zhè)一(yī)需求。Broad研究所張鋒團隊發明(míng)了以 CRISPR爲基礎的(de)SHERLOCK技術可(kě)以對(duì)核酸 進行(xíng)高靈敏度的(de)定性檢測,但精确定量評估時 仍采取了數字PCR進行(xíng)确認
7無創産前篩查
唐氏綜合征、地中(zhōng)海貧血或胎兒(ér)遺傳性耳聾基因檢測等,目前無創檢測标本來源主要爲孕婦 血液,檢測胎兒(ér)DNA會(huì)受到母體(tǐ)DNA的(de)幹擾, 依靠數字PCR可(kě)提高檢測準确性。對(duì)比NGS, 數字PCR技術可(kě)以提高工(gōng)作(zuò)效率、降低檢測成本
8微生物(wù)(病毒、細菌等)的(de)檢測
疾病預防控制(zhì)中(zhōng)心、出入境檢驗檢疫局系統的(de)實驗室可(kě)以将基于TaqMan探針法的(de)定量PCR體(tǐ)系無縫地轉移到數字PCR上,從而滿足該類實驗室對(duì)于檢測結果的(de)要求:靈敏度更高、重複性更好、無需依賴标準曲線的(de)絕對(duì)定量結果
9腫瘤治療的(de)伴随診斷
常用體(tǐ)液來源(如(rú)血液,胸腹水,唾液及尿液等) 的(de)待檢标本中(zhōng)的(de)DNA,有正常脫落體(tǐ)細胞和(hé)病變脫落細胞兩種來源,前者的(de)量遠(yuǎn)大于後者。通(tōng)過微液滴處理能(néng)在(zài)每個微液滴中(zhōng)有效減少(shǎo)正常體(tǐ)細胞DNA的(de)幹擾,實現腫瘤标記物(wù)的(de)有效檢測,如(rú) EGFR, ALK, ROS1, KRAS、BRAF 等 基因的(de)突變檢測、乳腺癌/胃癌的(de)HER2基因擴增檢測等,應用于腫瘤精準醫學(xué)的(de)伴随診斷
10移植排斥監控
接受肝髒移植的(de)患者,目前用于檢測器官排斥反應的(de)常規方法是監測患者血液中(zhōng)的(de)生化指标異常,一(yī)般情況下超過50%的(de)移植器官功能(néng)已經喪失。新的(de)研究表明(míng)通(tōng)過對(duì)七例術後移植患 者的(de)移植物(wù)遊離DNA進行(xíng)數字PCR檢測,更早發現了兩例發生排斥反應的(de)患者,取得(de)了令人(rén) 滿意的(de)結果






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